玉米赤霉烯酮免疫親和柱的凈化過程以及結(jié)果判定詳細(xì)描述
點(diǎn)擊次數(shù)：1701 更新時(shí)間：2020-12-16
玉米赤霉烯酮(Zearaleaone)又稱F-2毒素，是玉米赤霉菌的代謝產(chǎn)物，具有類雌激素樣作用，具有較強(qiáng)的生殖毒性和致畸作用，可引起動物發(fā)生雌激素亢進(jìn)癥，導(dǎo)致動物不孕或流產(chǎn)，對家禽、豬、牛和羊的影響較大，給畜牧業(yè)帶來很大的經(jīng)濟(jì)損失。
玉米赤霉烯酮免疫親和柱試驗(yàn)原理：
本產(chǎn)品的測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，玉米赤霉烯酮單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的玉米赤霉烯酮經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過玉米赤霉烯酮免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)，玉米赤霉烯酮與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫玉米赤霉烯酮，然后注入到分析儀器中用于檢測。
玉米赤霉烯酮免疫親和柱凈化過程：
1、3mL柱管取出上方堵頭，減去上堵頭螺紋下突出部分，插回柱子上(1mL柱管上方堵頭取出后斜 剪斷，然后再插回柱子上)，另一端與20mL針筒固定后使用；
2、準(zhǔn)確移取上述混勻?yàn)V液，注入針筒中，調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱；
3、用20mL 水沖洗柱子，流速1秒/滴，棄去流出液，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余 液體；
4、準(zhǔn)確加入2mL甲醇(色譜級)洗脫，流速自然重力，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有 殘余液體。收集全部洗脫液；
5、過有機(jī)濾膜(孔徑0.22μm)后，進(jìn)行HPLC測定；或用氮?dú)獯蹈?，?jīng)流動相復(fù)溶，過有機(jī)濾膜 (孔徑0.22μm)后，參照GB 5009.209-2016或GB/T 28716-2012條件進(jìn)行HPLC測定。
結(jié)果判定：
經(jīng)玉米赤霉烯酮免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計(jì)或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測。收集到的1ml洗脫液中的玉米赤霉烯酮含量相當(dāng)于1g樣品中玉米赤霉烯酮含量。
過程中的注意事項(xiàng)：
1. 親和柱使用前，需要提前平衡30min至室溫；
2. 親和柱與20mL針筒連接時(shí)，一定旋緊20mL針筒與堵頭連接處，防止上樣過程漏液；
3. 采用大量程移液器準(zhǔn)確移取混勻?yàn)V液進(jìn)行上樣；樣液流過柱體的速度不能過快，采用固相萃取架過柱 時(shí)可以調(diào)節(jié)流速為2秒/滴，若無此設(shè)備，自然重力流速也可；
4. 沖洗柱子時(shí)保持自然重力流速即可；對于醬油、醋、油類、玉米加工副產(chǎn)物及飼料等顏色較深的樣品， 可以先用10mL 0.1%吐溫20-PBS清洗，再用10 mL 10%甲醇-水沖洗，后用10mL水沖洗柱子；
5. 柱子沖洗過后一定要用洗耳球吹干柱子內(nèi)殘余的液體，但不能讓柱子干燥時(shí)間過長，要立即加入洗脫 液；
6. 采用玻璃移液管準(zhǔn)確移取2mL色譜級甲醇進(jìn)行洗脫，自然重力流速即可(不可施壓)，后一定要用 洗耳球吹干柱子內(nèi)殘余的甲醇，收集全部洗脫液；
7. 洗脫液必需先經(jīng)過0.22μm濾膜過濾才能進(jìn)行HPLC測定；
8. HPLC測定值接近高檢出值時(shí)，樣本實(shí)際含量可能大于柱容量而造成流穿，需減少上樣體積。
適用范圍及性能：
用于定量檢測谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的玉米赤霉烯酮時(shí)的樣品前處理。
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